Alexa Fluor 405 NHS Ester，AF405-NHS，高亮度紫蓝色荧光活性试剂
Alexa Fluor 405 NHS Ester，AF405-NHS，高亮度紫蓝色荧光活性试剂
Alexa Fluor 405 NHS Ester（简称AF405-NHS）是一种高亮度紫蓝色荧光活性试剂，由Alexa Fluor 405荧光染料通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯活化形成。其主要功能是通过NHS酯端与蛋白质、肽、核酸及其他含胺基的生物分子形成稳定的共价偶联，实现荧光标记。AF405-NHS兼具化学稳定性、光稳定性和高水溶性，适用于免疫标记、流式细胞分析、荧光显微成像以及多通道共定位实验。
Alexa Fluor 405的激发峰约为401 nm，发射峰约为421 nm，属于紫蓝色荧光波段。其窄发射光谱和高量子产率使其适合与其他荧光染料组合进行多通道标记，尤其在多色荧光成像和高分辨率显微观察中具有优势。AF405-NHS能够在温和条件下与靶分子特异性反应，标记效率高，对生物分子功能干扰小。
成分分析
Alexa Fluor 405染料核心
化学结构：Alexa Fluor 405属于磺化荧光素衍生物，其核心由多环芳香共轭体系构成，提供高量子产率和强荧光亮度。
磺酸盐基团：侧链上的磺酸基提高染料水溶性，降低在生物体系中的非特异性吸附。
光学特性：激发波长401 nm，发射波长421 nm，荧光信号亮度高、光稳定性良好。
NHS酯活化端
化学性质：NHS酯是羧酸的活化形式，可与一级或二级胺基发生亲核反应，形成稳定的酰胺键。
反应机理：在pH 7.2–8.5缓冲体系中，胺基对NHS酯碳原子亲核攻击，生成共价酰胺键并释放N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）。
反应特点：高特异性、温和条件下完成，避免破坏蛋白质或核酸结构。
偶联分子特点
NHS酯通过柔性碳链与荧光核心连接，偶联后的荧光信号不受空间阻碍影响。
分子量较小，偶联后对靶分子空间构象影响小，保持生物分子功能。
偶联产物稳定，可在缓冲体系和细胞条件下使用。
化学性质
荧光核心特性
多环芳香共轭体系提供高量子产率和亮度。
光漂白速率低，可用于长时间成像。
发射光谱窄，便于多通道荧光实验。
NHS酯活性端特性
与胺基快速反应，形成稳定酰胺键。
在水溶液中易水解，需在干燥或有机溶剂条件下保存。
反应温和，可标记蛋白质、抗体、肽及其他含胺基分子。
稳定性与溶解性
干燥避光条件下长期稳定。
可溶于DMSO、DMF等有机溶剂。
在缓冲液中应立即使用以防NHS水解。
具有良好的光稳定性和化学稳定性，适合细胞和组织成像。
物理性质
外观与溶解性
干燥状态下为淡黄色或淡紫色固体粉末。
可溶于有机溶剂（DMSO、DMF、乙腈）和少量水缓冲体系。
溶液呈紫蓝色荧光，可直接用于荧光标记实验。
光学特性
激发波长：约401 nm
发射波长：约421 nm
发射峰窄、亮度高，适合荧光显微镜、流式细胞仪及高通量检测。
功能与应用
蛋白质与肽标记
可标记蛋白质赖氨酸残基或肽氨基端，形成稳定荧光复合物。
应用于免疫检测、Western blot、ELISA及蛋白质追踪。
细胞与组织成像
可用于固定或活细胞染色，实现蛋白质和细胞器分布观察。
与其他荧光染料组合，可进行多通道共定位分析。
流式细胞分析
高亮度和光稳定性保证多通道流式分析精确可靠。
荧光定量与多功能标记
可用于生物分子定量、糖蛋白标记、酶标底物分析及纳米颗粒追踪。
多通道实验兼容性
紫蓝光波段荧光可与绿色、橙红及远红荧光染料组合，实现多色共定位和复合分析。
总结
Alexa Fluor 405 NHS Ester（AF405-NHS）是一种紫蓝色荧光活性试剂，通过NHS酯端可与蛋白质、肽、核酸及含胺基小分子共价偶联。其成分包括Alexa Fluor 405荧光核心和NHS活性端，兼具高亮度荧光、光稳定性好、水溶性强及化学稳定性高。性状为淡黄色固体，可溶于有机溶剂，激发波401 nm，发射波421 nm。AF405-NHS广泛应用于蛋白质标记、细胞和组织成像、流式细胞分析、荧光定量和多通道共定位实验，是现代荧光标记和分子生物学研究中不可或缺的工具。