黄瓜遗传转化

黄瓜遗传转化主要采用农杆菌介导法，以子叶或子叶节为外植体，通过组织培养再生转基因植株，适用于基因功能研究和抗逆育种。

转化流程要点
典型农杆菌介导子叶/子叶节法包括以下步骤：

取材：7–10天无菌苗龄的子叶或子叶节，预培养1–2天调整内源激素，提高细胞分裂活性。

侵染：用GV3101、EHA105等菌株（OD600≈0.5–1.0），浸泡或真空抽吸10–20 min，加乙酰丁香酮（AS，100–200 μmol/L）诱导vir基因。

共培养：暗培养2–3天（25℃），后用1/2 MS液体洗脱农杆菌3次，转入含筛选剂（如卡那霉素50–100 mg/L）的分化基。

再生与筛选：每2周继代，诱导不定芽（6-BA 2–4 mg/L + NAA 0.1–0.5 mg/L），转芽延长/生根基，炼苗移栽。

关键优化因素
基因型依赖强，津优/津研系列再生率高（可达100%）；真空侵染提升效率至90%，活性炭（0.5%）防褐化，促进生根。
预培养1–2天、共培养pH 5.6–5.8最佳，最高报道转化率29%，但侵染与再生位点不一致是瓶颈。

替代方法
子房注射（授粉后8 h）或花粉管途径可绕开组培，适合育种，但效率低、需大群体筛选。
CRISPR载体转化常结合GUS瞬时表达预验证，阳性株经Southern/qPCR鉴定。