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芥菜遗传转化

芥菜遗传转化主要采用农杆菌介导法,以下胚轴或子叶为外植体,通过组织培养再生转基因植株,转化效率可达较高水平,常用于抗病和抗逆研究。

主流方法
下胚轴法:暗培养7天芥菜下胚轴为外植体,预培养后农杆菌侵染,诱导愈伤组织,抗性筛选再生,获得阳性苗系。

叶片/子叶法:类似甘蓝型油菜,预培养3–4天,菌浓度D600=0.5、共培养4天,MS+6-BA(2.0 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)分化基,Kan 25 mg/L筛选。
典型流程(下胚轴法)
种子灭菌,暗培养7天取下胚轴。

农杆菌(载目标基因载体)侵染,共培养诱导愈伤。

抗性筛选、脱分化再生,PCR鉴定目标基因整合与表达。

关键优化
预培养3–4天提升感菌性,菌浓度0.5避免毒害;PCR扩增目的带验证成功,适用于功能基因分析。

http://www.jsqmd.com/news/495642/

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