兔抗53BP1抗体亲和纯化，高效富集目标蛋白，低丰度样品稳定输出
53BP1（p53结合蛋白1）是DNA双链断裂损伤应答通路中的关键早期响应因子，在维持基因组稳定性、调控修复途径选择及肿瘤抑制中发挥核心作用。针对53BP1的高特异性抗体是研究DNA损伤修复、细胞周期检查点以及肿瘤发生机制的重要工具。本文详细介绍由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗53BP1亲和纯化多克隆抗体（货号：A300-273A）的技术参数、生产工艺、Western blot应用条件及实验要点，为用户提供系统的操作参考。
一、产品基本规格
该抗体为兔多克隆抗体，靶向人53BP1蛋白（由TP53BP1基因编码，GeneID 7158），同时与小鼠53BP1具有交叉反应性。抗体形式为完整IgG，未偶联标记物，亚型为IgG。采用特异性表位亲和纯化工艺获得。抗体浓度为1000 µg/ml（1 mg/ml），保存于Tris-柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液（pH 7–8）中，含0.09%叠氮钠作为防腐剂。储存条件为2–8°C，自收货之日起有效期为一年。
注意事项：缓冲液中含叠氮钠，可抑制过氧化物酶活性。对于常规Western blot检测，一抗稀释至工作浓度后（如1:2,000–1:10,000），叠氮钠浓度极低（<0.000045%），对HRP二抗活性影响可忽略。若进行超高灵敏度化学发光检测，可通过透析或超滤去除叠氮钠。叠氮钠具毒性，操作时需戴手套并妥善处置废液。
二、免疫原与表位信息
抗体采用特异性表位亲和纯化工艺。免疫原对应人53BP1蛋白第1925位氨基酸至C末端（C端截止于第1972位氨基酸）之间的区域（参考序列号NP_005648.1，GeneID 7158）。该表位位于53BP1的C端结构域，该区域包含与p53相互作用及DNA损伤应答相关的关键功能基序。亲和纯化时，将上述表位肽段固定于固相载体，从抗血清中捕获特异性IgG，确保抗体仅识别53BP1蛋白，而不与非相关蛋白发生交叉反应。
免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。
三、推荐的应用与实验条件
根据产品规格，该抗体主要验证用于Western blot（WB）。未提供IHC或IP的验证稀释度，用户如需拓展应用，需自行优化。
Western Blot（WB）
推荐稀释度：1:2,000 – 1:10,000
凝胶建议：推荐使用3–8% Tris-乙酸酯凝胶。53BP1分子量较大（约210–220 kDa），低百分比凝胶或梯度凝胶可获得更好的分离效果。常规Tris-甘氨酸体系也可使用，但建议采用4–12%梯度凝胶或6–8%固定浓度凝胶。
封闭与稀释：使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜（建议4°C缓慢摇动，以提高特异性结合）。
二抗：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（推荐货号A120-101P）。HRP标记二抗后，采用ECL化学发光法检测。
样品制备建议
提取全细胞裂解液时，推荐使用含蛋白酶抑制剂（PMSF、cocktail）和磷酸酶抑制剂（如Na3VO4、NaF）的RIPA缓冲液或NP-40裂解液。
由于53BP1是核蛋白，制备核提取物可显著富集目标蛋白。上样前建议进行蛋白定量，每孔上样30–50 µg总蛋白。
煮沸变性时间建议5–10分钟，53BP1分子量大且可能形成聚集，充分变性有助于改善电泳效果。
四、靶点生物学背景
53BP1（也称p53结合蛋白1、TDRD30）最初被鉴定为p53的相互作用蛋白。后续研究发现，它是DNA双链断裂（DSB）损伤应答中的核心调控因子。在DNA损伤发生后，53BP1通过其Tudor结构域识别组蛋白H4K20me2和H2AK15ub等表观标记，迅速被招募至损伤位点，形成核灶（foci）。
53BP1在修复途径选择中发挥关键作用：促进非同源末端连接（NHEJ）而抑制同源重组（HR）。它与Brca1形成拮抗关系，共同调控DSB修复方式的决策。在G1期，53BP1促进NHEJ；在S/G2期，被Brca1拮抗以允许HR进行。此外，53BP1还参与Chk2等检查点激酶的磷酸化激活，介导细胞周期阻滞。
53BP1的功能异常与肿瘤发生、免疫缺陷及衰老密切相关。在BRCA1突变的乳腺癌中，53BP1缺失可恢复部分同源重组功能并导致治疗抵抗。因此，该抗体适用于DNA损伤应答、肿瘤生物学及药物筛选等领域的研究。
五、产品性能特点
1. 精确定位的表位：靶向53BP1 C端第1925–1972位氨基酸，该区域在多个物种中相对保守，支持人/小鼠交叉反应性。明确的表位区域便于用户结合突变体或截短体实验进行验证。
2. 亲和纯化：抗原亲和纯化显著降低非特异性背景，在Western blot中呈现清晰的单一条带或少量特异条带。
3. 高稀释比：WB稀释度最高达1:10,000，抗体使用经济，适合高通量筛选或珍贵样本分析。
4. 人/小鼠交叉反应：经验证与小鼠53BP1反应，适用于鼠源细胞系或组织样本，拓展了应用范围。
5. 大分子量兼容性：产品明确推荐使用3–8% Tris-乙酸酯凝胶，说明针对大分子量蛋白（~220 kDa）进行了优化，确保转膜效率和检测灵敏度。
6. 稳定性：2–8°C储存一年，无需冷冻，避免反复冻融导致的效价下降。