兔抗ASH2抗体亲和纯化，四平台验证，满足表观遗传学全流程需求
一、产品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的ASH2抗体（货号A300-489A）是一款针对人ASH2L（ASH2 like histone lysine methyltransferase complex subunit）的兔源多克隆抗体，由美国制造，采用抗原亲和纯化工艺制备。该抗体以未偶联的完整IgG形式提供，浓度为1000 µg/ml，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等多种应用场景，是表观遗传学研究中检测组蛋白甲基转移酶复合物亚基的重要工具。
二、技术规格
参数 | 详细信息
靶标 | ASH2 / ASH2L
反应性 | 人
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
格式 | 完整IgG
亚型 | IgG
偶联物 | 未偶联
纯度 | 抗原亲和纯化
抗原物种 | 人
浓度 | 1000 µg/ml
保存条件 | 2-8°C
有效期 | 收货后1年
缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。
三、免疫原与纯化工艺
该抗体识别的表位位于人ASH2蛋白第575位氨基酸至C末端（第628位残基）之间（编号参考Swiss-Prot条目Q9UBL3，GeneID 9070）。表位覆盖了ASH2的C端结构域，该区域在复合物组装中发挥重要作用。
纯化方式：使用固相载体上固定的ASH2特异性表位进行抗原亲和纯化
浓度测定：通过比尔定律测定，1 mg/mL IgG在280 nm波长下的吸光度为1.4
四、应用方法与实验条件
免疫印迹（WB）
推荐稀释比：1:2000 至 1:20,000（稀释范围宽泛，高倍稀释仍可有效检测）
封闭与稀释液：5% 牛奶-TBST
一抗孵育：过夜孵育
细胞裂解物检测：使用山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）
免疫沉淀物检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）
免疫沉淀（IP）
推荐用量：6 µg抗体 / mg裂解物
染色质免疫沉淀（ChIP）
推荐用量：1-5 µg（该抗体过往批次已验证可用于此应用）
ChIP-chip：10 µg（过往批次已验证）
免疫组织化学（IHC）
推荐稀释比：1:500 至 1:2000
抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复
样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片
五、产品背景信息
ASH2在组蛋白甲基转移酶复合物中的角色
ASH2（Absent, Small, or Homeotic discs 2），正式基因名ASH2L，是人源Set1样组蛋白甲基转移酶（HMT）复合物的核心亚基之一。Set1样复合物负责组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）的单甲基化、二甲基化和三甲基化——这一表观遗传标记通常与转录激活相关。
复合物的多样性
ASH2与多种蛋白在多个Set1样复合物中发生相互作用，这些复合物包含不同的MLL家族成员组合。已知的相互作用伙伴包括：
功能类别 | 蛋白名称
甲基转移酶核心 | MLL、MLL2、MLL3、MLL4
核心调控亚基 | RBBP5、WDR5
辅助因子 | hDPY-30、hSwd2
染色质靶向 | CXXC1
转录调控 | HCF1、Menin、PTIP、PA1、NCOA6
表观修饰酶 | UTX（H3K27去甲基化酶）
六、生物学意义
ASH2L作为支架蛋白，在复合物的组装和催化活性中发挥关键作用。H3K4甲基化水平的失调与多种疾病相关，包括癌症、发育异常和血液系统恶性肿瘤。靶向ASH2L及其复合物的研究有助于深入理解表观遗传调控机制。
别名
ASH2、ash2 (absent, small, or homeotic)-like、ASH2L1、ASH2L2、ASH2-like protein、Bre2、set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2
七、使用建议与优化指南
1. 应用选择与起始用量
应用 | 起始用量/稀释比 | 优化方向
WB | 1:10,000稀释 | 根据表达丰度在1:2,000-1:20,000之间调整
IP | 6 µg/mg裂解物 | 低表达样本可升至10 µg/mg
ChIP | 2-3 µg /反应 | 在1-5 µg范围内优化
ChIP-chip | 10 µg /反应 | 确保足够的DNA产量
IHC | 1:1000稀释 | 在1:500-1:2000范围内测试；务必进行抗原修复
2. 免疫印迹注意事项
预期分子量：ASH2蛋白理论分子量约68 kDa，但可能因翻译后修饰出现迁移差异（60-75 kDa）
凝胶浓度：建议使用10-12% SDS-PAGE凝胶以获得良好分辨率
阳性对照：HeLa、HEK293或K562细胞裂解物可作为阳性对照，这些细胞中ASH2L普遍高表达
高倍稀释优势：该抗体推荐稀释比高达1:20,000，说明亲和力高，可有效节约抗体用量，降低非特异性背景
3. 免疫沉淀优化
裂解液选择：使用非变性裂解液（如含150 mM NaCl的NP-40裂解液）以维持蛋白复合物的天然状态
预清除：裂解物与Protein A/G琼脂糖珠预孵育30-60分钟，减少非特异性结合
抗体用量：从6 µg/mg裂解物开始，ASH2在多数细胞系中表达水平中等，如富集效率低可增加至10 µg/mg
洗涤条件：使用含0.1-0.5% Triton X-100或NP-40的TBS缓冲液，洗涤3-5次，每次5-10分钟
洗脱：使用2× SDS上样缓冲液，95°C加热10分钟，离心后取上清进行WB检测
4. 染色质免疫沉淀（ChIP）关键参数
交联：1%甲醛室温交联10分钟，甘氨酸终止（终浓度0.125 M）
染色质片段化：超声处理至DNA片段大小200-600 bp。建议在琼脂糖凝胶上验证片段化效率
抗体用量：从2-3 µg开始，ASH2作为复合物亚基，ChIP富集效率通常良好
对照设置：
阳性对照：使用H3K4me3抗体（ASH2复合物的催化产物）
阴性对照：使用兔同型IgG
qPCR引物设计：靶向已知ASH2结合区域（如HOX基因启动子或高表达基因的转录起始位点）
5. 免疫组织化学（IHC）优化指南
抗原修复：必须使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导修复。可选用高压锅（2分钟）或微波炉（高火15-20分钟）加热。省略此步骤可能导致信号完全丢失
封闭：使用5%正常山羊血清或5% BSA室温封闭1小时
一抗孵育：推荐4°C过夜孵育。从1:1000稀释开始，根据信号强度和背景优化
检测系统：推荐使用HRP标记的二抗配合DAB显色，或使用荧光标记二抗进行多重染色
对照设置：使用兔IgG同型对照替代一抗作为阴性对照；使用已知阳性组织（如扁桃体或睾丸）验证抗体性能
复染：推荐使用苏木精进行细胞核复染
6. 储存与稳定性
存放于2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性丧失
抗体在叠氮化钠存在下可稳定保存1年
取用时应使用无菌吸头，避免微生物污染
如需分装，建议分装后添加等体积甘油存放于-20°C，但产品说明书未明确推荐此方式，优先按指示保存