BD AbSeq——蛋白质与mRNA表达同步检测

蛋白质作为细胞功能的核心执行者，广泛参与细胞代谢、结构维持、信号转导等关键生命活动，其表达水平与修饰状态的精准检测，是深入解析细胞生理状态、阐明细胞功能机制的核心前提，对单细胞生物学研究具有重要的科学意义。

在单细胞分析领域，流式细胞术是蛋白质检测的传统常用技术，该技术依托荧光标记抗体实现细胞内蛋白质的特异性检测，但存在显著局限性：受荧光光谱重叠效应影响，其检测通道有限，难以实现蛋白质的高通量分析；同时，针对低表达蛋白质的检测灵敏度不足，无法满足微量蛋白检测需求。尽管质谱流式细胞术在检测通量与灵敏度上有所提升，但受限于设备成本高昂、操作流程复杂、样本前处理要求严苛，且无法实现细胞代谢活动的同步检测，使其在大规模单细胞蛋白分析中的应用受到极大制约。因此，开发兼具高灵敏度、高通量特性的单细胞蛋白分析技术，成为推动单细胞多组学研究发展的迫切需求。

微流控技术的迭代升级为单细胞精准分析提供了技术支撑，该技术可实现微小空间内细胞与试剂的精准操控，高效完成单细胞捕获、裂解、反应及检测等一系列实验流程。基于微流控技术开发的BD AbSeq技术，成功突破传统技术瓶颈，实现了单细胞水平蛋白质的高通量、高灵敏度检测，成为单细胞多组学研究的核心工具。

本文将重点介绍单细胞多组学研究利器——BD AbSeq技术，该技术可在单一实验中同步检测单细胞内蛋白质与mRNA的表达水平，既能深化对蛋白质生物学功能的认知，又能显著提升单细胞研究的效率，加速科研成果转化。

技术原理大揭秘

BD AbSeq技术核心依托寡核苷酸偶联抗体（Ab-oligos）创新技术，通过高通量测序数据实现蛋白质表达水平的精准量化。在该技术体系中，每一种抗体克隆均特异性偶联一段独特的寡核苷酸序列，该序列包含抗体特异性条形码（ABC），同时在其3'端设有poly（A）序列、5'端设有通用PCR扩增序列。实验过程中，通过二代测序技术对抗体特异性条形码（ABC）进行解码，即可精准获取目标蛋白质的表达丰度；当BD AbSeq技术与单细胞分析系统联合使用时，可实现同一样本中mRNA与蛋白质表达水平的同步检测，为单细胞多组学整合分析提供了高效技术路径。

技术优势亮点多

一、多组学分析助力精准细胞类型鉴定

BD AbSeq技术的核心优势的在于可同步提供高参数蛋白质表达数据与单细胞RNA-Seq数据，通过补充细胞类型特异性标志物信息，显著优化细胞聚类效果，助力研究人员更精准地表征细胞特性，深入阐明从mRNA转录到蛋白质翻译调控全过程的生物学机制。例如，在健康个体外周血单核细胞（PBMCs）的分析研究中，整合mRNA与蛋白质的多组学数据，相较于单一mRNA数据，能够更精准地定义细胞亚群，实现更清晰的细胞聚类，提升细胞类型鉴定的准确性。

二、精准检测低表达mRNA相关蛋白靶点

在mRNA与蛋白质表达水平不相关的场景中，BD AbSeq技术的优势尤为突出。以CD4和γδTCR受体检测为例，基于蛋白质表达数据可精准定义更细分的细胞亚群；针对mRNA低表达、传统技术难以检测的PD1靶点，BD AbSeq技术可精准识别其蛋白质水平的表达差异，为药物反应机制研究、靶点筛选提供关键数据支撑，具有重要的临床转化价值。

三、助力发现新的差异表达基因与生物标志物

CD45基因的不同剪接异构体（CD45RA和CD45RO）无法通过3’RNA-seq技术区分，而BD AbSeq技术可精准区分表达这两种异构体的初始T细胞（naïve T细胞）与记忆T细胞（memory T细胞）亚群。依托多组学整合分析能力，该技术可实现异质细胞群中基因表达的全面解析，助力研究人员发现新的差异表达基因与特异性生物标志物，为疾病诊断、预后评估提供新的研究方向。

四、实时观察免疫细胞早期激活反应

在免疫细胞激活机制研究中，BD AbSeq技术可同步分析免疫细胞早期RNA与蛋白质的表达变化，清晰捕捉细胞刺激4小时后多种激活标志物的动态变化特征；同时，可基于细胞反应差异定义新的细胞亚群，为免疫相关生物标志物的筛选、免疫激活机制的阐明提供强有力的技术支持。

五、深入探究基因调控机制

通过添加小分子抑制剂，抑制外周血单核细胞（PBMCs）激活过程中的转录、翻译及蛋白酶体活性，结合BD AbSeq技术与BD Rhapsody平台进行联合分析，研究发现TNF mRNA与CD69蛋白在不同细胞类型中的调控机制存在显著差异。该技术为探索复杂样本中多种细胞类型的基因调控网络、解析基因表达调控机制提供了全新思路与技术方法，推动单细胞多组学研究向更深层次发展。