Masson染色原理、步骤、判读及常见问题
Masson染色是组织病理检测中经典的三色染色技术，由法国医生Claude L. Masson研发，是病理实验中区分胶原纤维与其他软组织成分的手段。
在慢性炎症、机化及瘢痕形成过程中，胶原纤维会随着病理进展而出现。早期在H-E染色切片中，这些纤维常与纤维蛋白难以分辨，而胶原纤维特异性染色则可提供确证。例如：
慢性肾小球肾炎肾小球纤维化后，Masson染色呈蓝色
大叶性肺炎或血栓机化后，原有纤维蛋白灶内出现胶原纤维，染色呈蓝色
风湿性肉芽肿静止期，阿绍夫巨细胞消失，病灶内纤维被胶原纤维取代，染色呈蓝色
胃、十二指肠溃疡愈合期，溃疡底部形成胶原纤维性瘢痕
慢性阑尾炎时阑尾壁出现纤维化
肝硬化时胶原纤维增生——上述病变均可通过Masson染色清晰显示
染液原理
Weigert铁苏木素染液：由A液（苏木素）与B液（三氯化铁）组成，需现配现用、临用混合，核心作用是特异性染色细胞核，使核结构清晰显色、边界分明。
酸性品红-丽春红染液：特异性结合肌肉组织、细胞质、纤维蛋白等成分，将其染为鲜红色，是区分软组织与胶原纤维的基础染色试剂。
磷钼酸-磷钨酸分色液：关键分色试剂，具备选择性脱色作用，可洗脱胶原纤维表面的红色染料，同时保留肌肉、胞浆等组织的红色，为后续胶原纤维特异性染色奠定基础。
苯胺蓝/亮绿染液：胶原纤维专属染色液，苯胺蓝可将胶原纤维染为蓝色，亮绿可将其染为绿色，可根据实验需求灵活选择。
1%冰醋酸弱酸溶液：用于后期酸化固定，强化各组织成分的色彩对比度，避免染色模糊、串色问题。
染色步骤
脱蜡与水化：将石蜡切片依次浸入二甲苯Ⅰ（20 min）→ 二甲苯Ⅱ（20 min）→ 无水乙醇Ⅰ（10 min）→ 无水乙醇Ⅱ（10 min）→ 95%酒精（5 min）→ 90%酒精（5 min）→ 80%酒精（5 min）→ 70%酒精（5 min）→ 蒸馏水洗。
细胞核染色：用试剂盒中的Weigert铁苏木素染色5 min，自来水冲洗；1%盐酸酒精分化数秒，自来水洗；流水返蓝数分钟。
丽春红染色：丽春红酸性品红液染色5–10 min，蒸馏水快速漂洗。
磷钼酸处理：磷钼酸水溶液处理约3–5 min。
苯胺蓝复染：不经水洗，直接以苯胺蓝液复染5 min。
分化：1%冰醋酸处理1 min。
脱水、透明、封片：依次置入95%酒精Ⅰ（5 min）→ 95%酒精Ⅱ（5 min）→ 无水乙醇Ⅰ（5 min）→ 无水乙醇Ⅱ（5 min）→ 二甲苯Ⅰ（5 min）→ 二甲苯Ⅱ（5 min）；取出稍晾干，中性树胶封片。
结果判读
胶原纤维：呈蓝色或绿色。形态上可表现为束状、网状或弥漫分布的蓝色/绿色区域。正常组织中可见于皮肤真皮、肌腱、器官被膜等部位；在纤维化病变区域，则表现为蓝色/绿色异常增深、增宽。
肌纤维：呈红色。心肌、骨骼肌的横纹以及平滑肌细胞均呈现束状排列的红色条带。
胞浆：呈深浅不一的红色。
纤维素：呈红色。多见于血栓或炎症区域，表现为均质或网状的红色物质。
红细胞：呈橘红色或黄色，位于血管腔内。
细胞核：呈蓝黑色或黑褐色，形态为卵圆形或圆形，结构清晰。
常见问题
1. 胶原纤维着色浅甚至不着色
可能原因：磷钼酸/磷钨酸分色过度；苯胺蓝染色时间不足；组织固定不佳。
解决措施：适当缩短分色时间；延长苯胺蓝染色时间；确保采用中性福尔马林充分固定。
2. 肌纤维等红色成分不鲜明
可能原因：酸性品红染色不足；磷钼酸/磷钨酸处理过度导致红色被洗脱；冰醋酸处理时间过长。
解决措施：延长酸性品红染色时间；严格控制分色步骤；缩短冰醋酸处理时间。
3. 背景不干净，颜色对比模糊
可能原因：苏木素染色过深或分化不完全；脱蜡不彻底；染液陈旧或含沉淀。
解决措施：确保盐酸酒精充分分化；彻底脱蜡；过滤染液或更换新试剂。
4. 细胞核染色过浅
可能原因：苏木素染色时间短；返蓝不充分。
解决措施：延长苏木素染色时间；确保流水充分冲洗返蓝。