结肠“瑞士卷”制片法

在肠道病理研究中，如何完整保留小鼠结肠的全层结构、同时避免人为损伤，一直是实验操作的难点。本文分享一套改良版“瑞士卷”制片技术，无需剖开肠管、无需机械顶压，即可获得高质量的全结肠切片，特别适合炎症、隐窝异常等病变的连续观察。

处死与开腹

• 根据实验需求，可提前12-16小时禁食（不禁水）以减少肠内容物。

• 采用颈椎脱臼法快速处死小鼠，立即用75%酒精擦拭腹部。

• 沿腹中线剪开皮肤和肌肉，暴露腹腔，找到回盲部（呈囊袋状），并识别远端结肠（粗细交界处）。

冲洗与分离结肠

• 离断肠管：在结肠粗细交界处剪断，注意保留系膜侧约2 mm，避免损伤血管。

• 冲洗技巧：
  用1 mL移液器吸取PBS或Krebs液，将枪头水平对准肠管断端，保持同轴方向轻轻推入。缓慢推注液体，观察粪便和残渣从另一端排出。冲洗2-3次，直至流出液清澈即可。切忌用力过猛导致肠管过度扩张。

• 剥离系膜：从近端向肛门方向小心剥离系膜，完整取下整段结肠。

制作瑞士卷

• 先固定还是先卷？
  建议将新鲜冲洗后的结肠直接放入4%多聚甲醛中固定24小时。如果固定时间过长（超过48小时），组织会变脆。此时可以先用固定液涮一下，立即取出卷制，无需线扎也能成型。

• 卷制操作：
  将固定好的结肠平铺在滤纸上，用眼科镊夹住一端，向系膜侧轻轻卷起，形成紧实的螺旋状。可用细线临时固定，然后放入包埋盒进行石蜡包埋。

• 切片与染色：切片厚度4-5 μm，常规HE染色后封片观察。

关键要点提醒

• 处死后操作要快，最好在3分钟内完成冲洗和分离，防止组织自溶或痉挛。

• 冲洗压力宁小勿大，移液枪头比注射器针头更友好，因为枪头尖端是漏斗形，更容易无损伤插入。

• 卷制时不要用力拉拽肠管，保持自然弧度即可。

• 系膜必须剔除干净，否则影响切片质量。

常见问题解答

问：用移液枪冲洗和用注射器有什么区别？我以前用注射器总是冲不干净，还容易把肠管冲破。
答：移液枪的枪头前端细小且呈锥形，可以轻松进入肠腔而不刮伤内壁。注射器针头或塑料尖端往往较粗、边缘锐利，加上如果操作中不小心扯断了系膜，肠道会立即痉挛收缩，内容物就被“锁”住了。按本方法保留系膜、快速操作（3分钟内完成），并用移液枪温和冲洗，基本不会出现损伤。

问：先固定再卷，组织不会变得又硬又脆、一卷就碎吗？
答：关键在固定时间。24小时刚好，组织有一定韧性又保留形态。如果固定超过2天，确实会脆化。补救办法是：从固定液里取出后，用PBS涮一下，趁还湿润时立即卷制，动作轻柔，不用线绑也能成型。

问：需要把肠管纵向剪开铺平吗？
答：完全不需要。本方法的最大亮点就是不剪开肠管，直接完整卷曲，切片时从侧面切下去就能同时看到所有层次。