兔抗MAD2抗体亲和纯化：高效免疫沉淀，并避免与其它有丝分裂检查点蛋白交叉反应

一、产品概述

MAD2（mitotic arrest deficient 2，有丝分裂阻滞缺陷蛋白2）是纺锤体组装检查点的关键组分，负责确保在后期 onset 之前所有染色体正确排列在赤道板上。MAD2是MCC复合体（包含BubR1、Bub3、Cdc20和MAD2）的亚基之一，该复合体可抑制APC/C（后期促进复合物/ cyclosome）。MAD2受MAD1调控。MAD2功能异常可导致染色体不稳定性，与肿瘤发生密切相关。

本文介绍的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗MAD2抗体（亲和纯化）（货号：A300-301A） 是一款针对人源MAD2蛋白的高特异性多克隆抗体，可识别人和小鼠MAD2，适用于免疫沉淀和免疫印迹应用。

二、产品规格

参数 | 详细信息

靶标 | MAD2

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆类型 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 位于第155位氨基酸至C末端之间的区域（具体映射至SwissProt Q13257编号下残基150至C末端残基205）

同种型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 µg/mL（1 mg/mL）

储存条件 | 2–8°C

保质期 | 自收到之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮化钠

生产流程 | 使用固定在固相载体上的MAD2特异性表位进行亲和纯化。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280下吸光度为1.4）

三、推荐应用与实验条件

本抗体经验证可用于免疫沉淀和免疫印迹两种应用类型。以下为推荐条件。

3.1 免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000

封闭及抗体稀释液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育条件：过夜孵育

二抗选择：

检测细胞裂解液：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（货号A120-101P）

检测免疫沉淀样品：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）

3.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：6 µg 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

四、储存与稳定性

储存温度：2–8°C

有效期：自收到之日起1年内，按照指示条件储存可保持最佳性能

缓冲液成分：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液（pH 7–8），含0.09% 叠氮化钠作为防腐剂

重要提示：叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性。若下游检测采用HRP偶联二抗及化学发光底物，建议在使用前通过脱盐柱或透析去除叠氮化钠。若采用荧光检测或非酶促检测体系，则无需去除

避免反复冻融：建议分装保存于2–8°C，避免冷冻（反复冻融可能导致抗体变性）

五、产品优势总结

优势 | 说明

高浓度 | 1000 µg/mL（1 mg/mL），满足大量免疫沉淀和多次实验需求

双物种反应性 | 同时识别人和小鼠MAD2，扩展应用范围

亲和纯化 | 抗原特异性纯化，低非特异性背景

明确表位区域 | 免疫原位于155–C端（150–205），便于验证和交叉反应预测

含轻链特异性检测建议 | 提供免疫沉淀后Western Blot的优化方案，避免轻链干扰（MAD2分子量与轻链接近）

长保质期 | 2–8°C稳定储存1年

六、注意事项总结

1. MAD2分子量（~24 kDa）与兔IgG轻链（~25 kDa）接近：免疫沉淀后的Western Blot必须使用抗兔IgG轻链特异性二抗，否则轻链信号会严重遮挡目标条带。

2. 叠氮化钠干扰HRP检测：使用前根据检测体系决定是否去除。

3. 物种交叉反应：已验证人、小鼠，其他物种需自行验证。

4. 储存：2–8°C，不可冷冻。

七、结论

兔抗MAD2抗体（亲和纯化）是一款高浓度（1 mg/mL）、高特异性的多克隆抗体，适用于人和小鼠样本中MAD2蛋白的免疫沉淀和免疫印迹检测。其免疫原位于MAD2的C端区域（150–205），可有效识别全长MAD2。特别值得注意的是，由于MAD2分子量与兔IgG轻链非常接近，产品说明书中明确提供了免疫沉淀后Western Blot的优化检测方案（使用抗兔IgG轻链HRP抗体及正常猪血清），这一细节设计对于获取可靠的IP-WB数据至关重要。该抗体是研究纺锤体组装检查点、染色体不稳定性及肿瘤发生机制的有力工具。研究者可参考上述推荐条件进行实验优化，以获得高质量的检测结果。