兔抗MLL1抗体亲和纯化，批次间稳定，低背景，高信噪比
一、产品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的MLL1抗体（货号A300-374A）是一款针对人MLL1（混合谱系白血病蛋白1，亦称KMT2A）的兔源多克隆抗体，由美国制造，采用抗原亲和纯化工艺制备。该抗体以未偶联的完整IgG形式提供，浓度为1000 µg/ml，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、ChIP-chip、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等多种应用场景，是表观遗传学和白血病研究的理想工具。
二、技术规格
参数 | 详细信息
靶标 | MLL1（KMT2A）
反应性 | 人
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
格式 | 完整IgG
亚型 | IgG
偶联物 | 未偶联
纯度 | 抗原亲和纯化
抗原物种 | 人
浓度 | 1000 µg/ml
保存条件 | 2-8°C
有效期 | 收货后1年
缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。
三、免疫原与纯化工艺
该抗体识别的表位位于人MLL1蛋白第2725至2775位氨基酸残基之间（编号参考Swiss-Prot条目Q03164，GeneID 4297）。关键特征如下：
定位：表位位于MLL1蛋白经蛋白酶剪切后产生的C端180 kDa片段中
亚型识别：可识别MLL1的isoform 14P-18B
纯化方式：使用固相载体上固定的MLL1特异性表位进行抗原亲和纯化
抗体浓度通过比尔定律测定，其中1 mg/mL IgG在280 nm波长下的吸光度为1.4。
四、应用方法与实验条件
免疫印迹（WB）
推荐稀释比：1:2000 至 1:10000
封闭与稀释液：5% 牛奶-TBST
一抗孵育：过夜孵育
细胞裂解物检测：使用山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）
免疫沉淀物检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）
免疫沉淀（IP）
推荐用量：6 µg抗体 / mg裂解物
染色质免疫沉淀（ChIP）
推荐用量：1-5 µg（该抗体过往批次已验证可用于此应用）
ChIP-chip：10 µg（过往批次已验证）
注意：ChIP相关应用的数据基于过往批次的验证结果，新批次建议进行预实验优化。
五、产品背景信息
MLL1的结构与功能
MLL1（混合谱系白血病蛋白1），正式基因名KMT2A（赖氨酸甲基转移酶2A），是一种组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶，在表观遗传调控中发挥核心作用。MLL1作为转录调控因子，对胚胎发育过程中HOX基因的表达至关重要。它能够催化组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）的甲基化，这一修饰通常与转录激活相关。
临床相关性
MLL1参与多种染色体易位事件，这些易位与一系列血液系统恶性肿瘤密切相关，包括急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性髓系白血病（AML）。MLL1融合蛋白保留了其N端的AT钩和甲基转移酶结构域，但失去C端的调控区域，导致靶基因（如HOX家族）异常持续表达，从而驱动白血病发生。
蛋白加工
MLL1在前体蛋白水平发生蛋白酶剪切，产生N端320 kDa和C端180 kDa两个片段。本抗体识别的表位（2725-2775 aa）位于C端180 kDa片段内，因此可特异性地检测该剪切产物。
别名：
ALL-1、CXXC7、CXXC-type zinc finger protein 7、HRX、HTRX1、lysine (K)-specific methyltransferase 2A、lysine N-methyltransferase 2A、mixed lineage leukemia 1、MLL、MLL1、MLL1A、Myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia、trithorax-like protein、TRX1、WDSTS、zinc finger protein HRX
六、使用建议与优化指南
1. 应用选择与起始用量
应用 | 起始用量 | 优化方向
WB | 1:5000稀释 | 根据表达丰度在1:2000-1:10000之间调整
IP | 6 µg/mg裂解物 | 高丰度靶标可降至3 µg/mg；低丰度可升至10 µg/mg
ChIP | 2-3 µg /反应 | 建议同时设置同型IgG阴性对照和阳性对照抗体
ChIP-chip | 10 µg /反应 | 注意使用相应规格的微阵列平台
2. 样本制备注意事项
全长与剪切产物：MLL1以N端320 kDa和C端180 kDa两种形式存在。WB中可检测到约180 kDa的条带（对应C端片段）以及可能的全长条带（约500 kDa，需使用低浓度凝胶和适当转移条件）
蛋白酶抑制：MLL1易受蛋白酶降解，裂解缓冲液中务必添加新鲜蛋白酶抑制剂混合物（如PMSF、亮抑肽酶、抑肽酶）
裂解液选择：RIPA缓冲液适用于WB和IP；ChIP实验需使用专用的ChIP裂解缓冲液（含SDS）以充分交联染色质
3. 免疫印迹特殊考虑
由于MLL1分子量较大（全长约500 kDa，C端片段约180 kDa）：
建议使用6%或7.5% SDS-PAGE凝胶
转移条件：湿转，100V恒压转移2小时，或使用PVDF膜（甲醇活化）以获得更好的大蛋白结合
预染蛋白Marker应包含250 kDa以上条带
4. 免疫沉淀优化
裂解液选择：使用非变性裂解液（如NP-40裂解液，150 mM NaCl）以保持蛋白天然构象
预清除：裂解物与Protein A/G琼脂糖珠孵育30分钟，减少非特异性结合
抗体-珠偶联：可将抗体预先偶联至Protein A磁珠/琼脂糖珠，再与裂解物孵育（4°C过夜）
洗涤：使用含0.1-0.5% Triton X-100或NP-40的洗涤缓冲液，至少洗涤3次
洗脱：使用2× SDS上样缓冲液，95°C加热10分钟
5. ChIP实验关键参数
交联：1%甲醛室温交联8-10分钟，甘氨酸终止
染色质片段化：超声处理至片段大小200-600 bp
抗体用量：从2-3 µg开始，同时设置无抗体阴性对照和RNA聚合酶II或H3K4me3阳性对照
洗涤与洗脱：使用低盐、高盐、LiCl和TE缓冲液依次洗涤，提高特异性
DNA纯化：使用PCR纯化试剂盒或酚氯仿抽提
qPCR检测：设计引物靶向已知MLL1结合区域（如HOXA9或HOXD11启动子）
6. 对照设置
对照类型 | 用途 | 建议
阳性对照 | 验证抗体工作状态 | 使用K562或HEK293裂解物（WB）；使用已知MLL1结合位点的引物（ChIP）
阴性对照 | 评估背景信号 | WB中使用预免疫血清或兔IgG；ChIP中使用同型IgG
空珠对照 | IP中排除非特异性结合 | 使用不含抗体的Protein A/G珠子
7.储存与稳定性
存放于2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性丧失
抗体在叠氮化钠存在下可稳定保存1年。如需长期保存，可分装后添加50%甘油存放于-20°C（但需注意产品说明书未明确推荐此方式，建议优先按指示保存）
避免微生物污染，使用无菌吸头取用