【技术应用】PLA技术“点亮”蛋白互作，破解动脉粥样硬化新机制！

动脉粥样硬化是心梗、脑梗的元凶。科学家发现，血管分叉处受“扰动血流”冲击的内皮细胞特别容易发炎、长斑块。但背后的分子“推手”是谁？最新发表在《Circulation》的研究给出了答案：一个叫DAPK2的激酶，并首次用邻近连接（Proximity Ligation Assay， PLA）分析 技术“拍下”了它和搭档PKM2的亲密互动。

01 血流力学如何“教坏”血管内皮？

在血管平直段，层流保护内皮；而在分叉、弯曲处，扰动流（OSS）会下调保护因子KLF2，进而诱导DAPK2高表达。DAPK2磷酸化代谢酶PKM2的Thr45位点，促使PKM2入核、激活STAT1，最终上调黏附分子VCAM-1/ICAM-1，吸引炎症细胞，推动斑块形成。

02 核心看点：PLA如何让蛋白互作“现原形”？

传统免疫共沉淀（Co-IP）只能证明两种蛋白在细胞裂解液中结合，却无法告诉你它们是在细胞核还是细胞质、是哪些细胞在“作案”。PLA 则不同：它用两个一抗分别“钩住”目标蛋白，二抗带上互补的DNA链；只有当两个蛋白距离<40nm时，DNA链才能连接成环并扩增，发出红色荧光点。一个点，就是一次相互作用。

03 本文中PLA的两大关键发现

1. DAPK2与PKM2的“握手”

静态条件下PLA信号稀疏；而扰动流刺激后，内皮细胞内爆发出大量红色亮点，直接证明OSS促进了DAPK2-PKM2复合物形成。阴性对照（IgG）无信号，排除了假阳性。

图1 PLA验证OSS促进了DAPK2-PKM2的结合（Guo et al., 2026）。

2. 核内PKM2与STAT1的“联盟”

更精彩的是，PLA显示扰动流诱导了细胞核内PKM2与STAT1的结合；当敲低DAPK2后，核内PLA信号几乎消失。这首次原位证实：DAPK2磷酸化PKM2后，PKM2进入细胞核“拉拢”STAT1，共同激活炎症基因。

04 为什么非PLA不可？

因为DAPK2-PKM2的相互作用是瞬时的，且PKM2-STAT1的结合严格发生在核内。Co-IP会打碎细胞，丢失空间信息；而PLA能在完整细胞中定位，让您一目了然地看到：哪个蛋白对在什么条件下、在细胞的哪个角落“勾结”。

05 小结

这项研究不仅揭示了DAPK2-PKM2-STAT1促动脉粥样硬化新轴，更展示了PLA作为原位蛋白互作验证金标准的强大能力。未来，PLA将继续帮助科学家“看见”更多疾病相关的分子暗语。

参考文献

Guo S, Xu L, Chen Y, et al. DAPK2 Regulates PKM2 Phosphorylation at Threonine 45 to Facilitate Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis.Circulation,2026, 153(15): 1117-1140.