兔抗FANCI抗体亲和纯化，IP-WB全流程兼容设计，一站式解决FANCI蛋白分析功能
产品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的FANCI抗体（货号A301-254A）是一款针对人源范可尼贫血互补组I蛋白（FANCI）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人源FANCI蛋白，适用于免疫印迹及免疫沉淀检测，为DNA双链断裂修复及染色体稳定性维持机制研究提供可靠工具。
核心规格参数
参数 详细信息
靶标 FANCI（范可尼贫血互补组I蛋白）
反应性 人类
宿主 兔
克隆性 多克隆
免疫原 第1025–1075位氨基酸区域
抗体形式 完整IgG
同型 IgG
偶联物 未偶联
纯度 抗原亲和纯化
抗原种属 人类
浓度 200 µg/ml
缓冲液 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠
储存条件 2–8 °C
保质期 到货后1年
免疫原与特异性验证
A301-254A抗体采用固相载体上固定的FANCI特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人FANCI蛋白的第1025至1075位氨基酸之间（参考编号NP_060663.2，GeneID 55215）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。
特异性验证要点：
免疫原区域位于蛋白C端附近（1025–1075 aa），该区域在FANCI同源物中具有较强特异性
经抗原亲和纯化，显著降低非特异性交叉反应，尤其避免与FANCD2等其他FA家族蛋白的交叉识别
建议使用FANCI敲除细胞裂解液作为阴性对照验证特异性
应用方法与推荐工作浓度
免疫印迹（WB）
推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000
实验方案要点：
封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST
一抗孵育条件：4°C孵育过夜（推荐）
细胞裂解液检测：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗
免疫沉淀物检测：使用兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景
> 功能性提示：FANCI在细胞中表达水平相对较低，建议使用富集了染色质结合组分的裂解液或同步化至S/G2期的细胞样本，以提高检测灵敏度。
免疫沉淀（IP）
推荐用量：6 µg 抗体 / mg 细胞裂解物
操作注意事项：
裂解缓冲液推荐使用含150–300 mM NaCl的非变性裂解液（如NP-40或Triton X-100缓冲液），以保留蛋白复合物完整性
裂解液中必须添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、蛋白酶抑制剂混合物）及磷酸酶抑制剂
抗体与裂解物共孵育：4°C旋转孵育2小时至过夜
使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物
洗脱后建议使用轻链特异性二抗进行WB检测，避免重链信号干扰
复合物共沉淀：FANCI通常与FANCD2形成异源二聚体（I-D复合物），在IP-FANCI后，可用WB检测FANCD2的共沉淀，以验证复合物完整性。
靶点生物学背景：FANCI
FANCI（范可尼贫血互补组I蛋白）是范可尼贫血（FA）通路的核心成员之一。FA通路是一种专门的DNA链间交联修复机制，对维持基因组稳定性至关重要。
核心功能：
1. DNA链间交联修复：FANCI与FANCD2形成异源二聚体（I-D复合物），在DNA损伤后被单泛素化激活，定位于染色质上的DNA损伤位点，募集下游修复因子（如FAN1、BRCA1、BRCA2/FANCD1等），通过同源重组或转损伤合成途径修复交联损伤。
2. 染色体稳定性维持：FANCI参与DNA双链断裂修复及复制叉停滞后的重启过程。FA通路功能缺失直接导致染色体脆性增加及自发染色体断裂。
3. 复制叉保护：FANCI-FANCD2复合物在复制压力下保护新生DNA链免受过度降解。
临床关联：
FANCI基因突变导致范可尼贫血互补组I，这是一种常染色体隐性遗传病，特征包括：进行性骨髓衰竭（全血细胞减少）、先天性畸形（如拇指畸形、皮肤色素沉着、身材矮小）、以及极高的癌症易感性（尤其是急性髓系白血病和头颈部鳞癌）。
FANCI在肿瘤细胞中常出现异常表达，可能影响化疗药物（尤其是DNA交联剂如丝裂霉素C、顺铂）的耐药性。
蛋白特征：
分子量：约150 kDa
结构域：包含N端核定位信号、与FANCD2相互作用的区域以及C端泛素化修饰位点
储存与稳定性指南
储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集及活性下降。
防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。若用于细胞培养或活细胞实验，需通过透析或脱盐柱去除。
稳定剂：0.1% BSA，降低非特异性吸附及管壁损耗。
有效期：自到货之日起1年。建议分装成单次使用量储存于2–8°C，避免反复开管。
总结：A301-254A是一款针对人FANCI蛋白C端区域（1025–1075 aa）的亲和纯化兔多抗，专门优化了IP（6 µg/mg裂解物）和WB（1:2000–1:10000）应用。其高特异性经抗原亲和纯化保障，适合研究范可尼贫血通路中FANCI-FANCD2复合物的组装、泛素化激活及DNA损伤修复功能。在IP-WB实验中，建议搭配轻链特异性二抗以避免信号干扰。该抗体为FA通路机制研究、DNA交联修复及癌症耐药性分析提供了可靠的工具。