猫骨髓间充质干细胞(BMMSCs)原代细胞 分离和成脂肪分化方案 云克隆厂家protocol

猫骨髓间充质干细胞(BMMSCs)原代细胞 Primary Feline Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells (BMMSCs) 成功制备出来，随后进行了成脂诱导（adipogenic induction），可以看到细胞中的白色脂肪滴，油红O染色成功，well done！

猫骨髓间充质干细胞分离培养方案：

样本：健康适龄家猫股骨 / 胫骨骨髓

试剂：PBS、肝素抗凝液、Ficoll 分离液、DMEM/F12、胎牛血清、双抗、分化染色试剂

分离步骤： 无菌抽取猫骨髓，肝素抗凝，PBS 等体积稀释混匀。 沿管壁叠加于 Ficoll 分离液上，室温 1500r/min 离心 20min。 吸取中间白膜层单个核细胞，PBS 洗涤 2 次去除杂质。 重悬于完全培养基，接种于培养瓶中。

猫骨髓间充质干细胞-白光x100

成脂分红诱导详细方案如下：

细胞准备：将对数生长期的fBM-MSCs，以2.0×10⁴ cells/cm²的密度接种于培养皿中。

诱导启动：在标准培养条件下（37℃，5% CO₂），待细胞融合度达到90%-100% 时，开始诱导分化。

周期化诱导：进行周期性的“诱导液-维持液”交替换液。一个典型周期为：

使用成脂诱导分化培养基诱导液培养3天。

更换为成脂诱导分化培养基维持液培养1天。

重复上述交替，总诱导周期为14-21天。在实验过程中，需要根据细胞形成的脂滴数量和大小，决定终止诱导的时机。

猫骨髓间充质干细胞成脂诱导出白色脂肪滴

油红O染色对分化形成的脂肪细胞

最终鉴定：诱导完成后，使用油红O染色对分化形成的脂肪细胞进行鉴定。成功分化的细胞内会出现被染成红色或橘红色的脂滴。

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